一、代谢反应速率异常低或无转化
原因:微粒体失活、NADPH再生系统失效、孵育温度/时间不足或底物溶解度差。
解决方法:
确认微粒体储存条件(–80℃冻存,避免反复冻融),使用前冰上解冻;
新鲜配制NADPH再生液(含NADP、葡萄糖-6-磷酸、G6PDH),或使用商业稳定型试剂盒;
严格控制孵育条件:37℃水浴、充分振荡(如300rpm)、时间通常30–60分钟;
对难溶化合物,使用助溶剂(如乙腈≤1%),并设溶剂对照组。
二、实验重复性差(RSD>15%)
原因:加样误差、微粒体浓度不均、移液器未校准或反应终止不及时。
解决方法:
使用多通道移液器或自动化工作站减少人为误差;
微粒体使用前充分混匀(轻柔涡旋,避免起泡);
校准移液器,尤其在10–100μL小体积操作时;
到时立即加入终止反应,快速离心去除蛋白。
狗肝微粒体
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https://www.chem17.com/st480288/erlist_2258454.html
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